很多做研究的老師和同學(xué)，在使用路陽的熒光蛋白激發(fā)光源時候遇到拍照問題，明明用熒光蛋白觀察眼鏡能夠清晰看到熒光蛋白的表達(dá)，但很的單反相機(jī)拍不出來的熒光照片。總覺得熒光蛋白的拍照濾鏡有問題，今天，我們工程師將單反相機(jī)拍熒光照片的基礎(chǔ)知識給大家普及一下。

因單反相機(jī)是非常智能的相機(jī)，大家使用時候基本都是調(diào)整到auto檔位，相機(jī)能夠感知環(huán)境光線的明暗，自動調(diào)整曝光參數(shù)。拍出來的照片非常nice。但熒光圖像拍照環(huán)境和常規(guī)照片不一樣，熒光拍照時候，有強(qiáng)烈的激發(fā)光，需要用熒光拍照濾鏡將激發(fā)光過濾掉，讓熒光蛋白的熒光成像，有時候熒光表達(dá)的不是很亮，我們需要調(diào)整單反相機(jī)的ISO、快門速度和光圈大小。下面將這幾個參數(shù)給大家做一個簡單介紹：

1. 熒光拍照需要的設(shè)備：

   激發(fā)光源、拍照濾鏡、單反相機(jī)、三腳架。

   
   

2. 安裝轉(zhuǎn)接環(huán)

   如果您的單反相機(jī)鏡頭不是67mm，需要一個轉(zhuǎn)接環(huán)才能安裝到相機(jī)鏡頭上。鏡頭尺寸一般標(biāo)注在鏡頭的zui前面一般標(biāo)注為Φxx mm，如右圖為直徑77mm的鏡頭。先把轉(zhuǎn)接環(huán)旋到鏡頭上，再把濾鏡旋到轉(zhuǎn)接環(huán)上即可。

   

3. 單反相機(jī)的撥輪：

4. 熒光攝影主撥輪選擇M檔

模式轉(zhuǎn)盤的檔位介紹：

全自動拍攝模式：此模式也叫傻瓜模式，不用設(shè)置任何參數(shù)直接可以拍攝照片。

P檔程度模式：也叫自動可調(diào)模式，自動檔，快門、光圈由相機(jī)來設(shè)定，也可以自己調(diào)節(jié)。

TV快門優(yōu)先：快門優(yōu)先多用于拍攝運(yùn)動的物體上，特別是在體育運(yùn)動拍攝中zui常用。

AV光圈優(yōu)先：光圈優(yōu)先是一種曝光控制模式，適合拍攝人像 微距。

M檔手動曝光：手動曝光模式，通過前撥輪設(shè)置快門速度，背面的快速轉(zhuǎn)盤設(shè)置光圈大小。

B檔快門：就是B門，長時間曝光或拍夜景用。即不松手快門不關(guān)閉。（須用三角架和快門線，否則影像發(fā)虛）同時通過前撥輪或背面的快速轉(zhuǎn)盤還可調(diào)整光圈參數(shù)。

C檔：用戶自定義模式。

SCN全自動場景模式（人像風(fēng)景夜景等多種拍攝模式）

CA創(chuàng)意自動：在此模式下用戶可以通過菜單調(diào)整圖像亮度、景深、照片風(fēng)格等功能設(shè)置。

5.光圈：

光圈是一個用來控制光線透過鏡頭，進(jìn)入機(jī)身內(nèi)感光面的光量的裝置，通常在鏡頭內(nèi)。通俗講就是光圈像一個門一樣，門大進(jìn)光多，照片越亮；門小進(jìn)光少，照片越暗。

表達(dá)光圈大小用F值:

完整的光圈值系列如下： F1， F1.4， F2， F2.8， F4， F5.6， F8， F11， F16， F22， F32， F44， F64

數(shù)值越小，進(jìn)光量越大（光圈越大），數(shù)值越大，進(jìn)光量越小（光圈約小）

光圈兩大作用：控制進(jìn)光量，控制景深

如何調(diào)整光圈：

佳能單反相機(jī)在M檔的時候撥動付撥盤可調(diào)整快門速度，按住AV按鈕并轉(zhuǎn)動付撥輪調(diào)整光圈大小。

佳能60D是先按住Q鍵，再轉(zhuǎn)動付撥輪

6. ISO調(diào)整：熒光拍攝建議選擇ISO200

 ISO：（International Organization for Standardization的縮寫）

在膠片時代，膠片的感光度就是指底片對于光線的敏感程度，也可以理解為底片對于光線的反應(yīng)速度。如今的ISO也是指相機(jī)中CMOS圖像感應(yīng)器對光線的敏感度。ISO對于成片zui終的清晰度起到至關(guān)重要的作用。在M（Manual Exposure）檔下，能夠控制照片曝光量的就只有光圈、快門速度與ISO三項數(shù)值。

1. 光圈越大，進(jìn)入相機(jī)的光就越多。光圈越小，進(jìn)入相機(jī)的光就越少。

2. 快門速度越慢，進(jìn)入相機(jī)的光就越多。快門速度越快，進(jìn)入相機(jī)的光就越少。

3. ISO越低照片越暗，ISO越高照片越亮。ISO越低噪點(diǎn)越少，ISO越高噪點(diǎn)越多。

在保證照片正常曝光的情況下，ISO越低越好。

ISO怎么設(shè)置：

按下ISO檔位，并旋轉(zhuǎn)手柄輪盤，調(diào)到相應(yīng)ISO

7. 熒光攝影建議設(shè)置的參數(shù)：

選擇M檔：關(guān)閉閃光燈，ISO200,光圈F5.6,快門1/60

因單反相機(jī)的鏡頭尺寸不一樣，按鍵設(shè)置不同，參數(shù)設(shè)置會有差異。

建議大家ISO200下，分別調(diào)整光圈和快門速度，找到一個理想設(shè)置參數(shù)。

拍GFP熒光照片時候，有LUV-495A和LUV-520A兩種拍照濾鏡可選，LUV-495A不能隔離葉綠素的熒光。LUV-520A是窄帶濾色片，拍出來是純綠的圖片，效果對比如下:大家也可參考《熒光蛋白拍照濾鏡LUV-495A和LUV-520A的區(qū)別》

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